血液RNA提取樣本制備

2017-03-16    編輯:諾禾致源

血液是由紅細胞、白細胞及血小板構成,
哺乳動物成熟的紅細胞和血小板是無核的,
所以其RNA主要來自于白細胞,
245棋牌血液RNA提取樣本制備常見的方法有PAXgene RNA tube法和TRIzol法兩種。

PAXgene RNA tube法

TRIzol法

備注:

1.若購買商品化采血管,則無需另外加入抗凝劑,直接按比例加入TRIzol即可。
2.由于物種差異,生理狀態的不同,取樣操作過程等影響也會造成的RNA濃度及降解程度上的輕微差異。
3.因為血液冷凍后,再融解時細胞破裂會釋放RNA酶,從而導致RNA被嚴重降解,提取結果不理想,故不能用直接凍存的血液樣本來提RNA。
4.血液DNA樣本的制備要求為全血樣本,并加入抗凝劑,推薦使用EDTA抗凝的采血管收集樣品(由于會影響實驗,切勿使用肝素抗凝,無論是DNA還是RNA都不能使用肝素),冷凍后,干冰運輸。
5.紅細胞裂解液是一種不破壞白細胞又能充分的將紅細胞裂解去除(適用于人,大小鼠等哺乳動物新鮮血液),獲得血液樣品中全部白細胞并充分保證白細胞的生物活性的buffer。簡單來說,紅細胞裂解液是用來獲取哺乳動物血液中得有核細胞的。因此對于有核的禽類紅細胞,紅細胞裂解液是發揮不了作用的。使用紅細胞裂解需要注意:血液與裂解液需充分混合后,離心,獲得沉淀,用緩沖液清洗一遍后獲得白細胞。