免疫組庫機體免疫系統健康狀況的顯示器

2017-03-16    編輯:諾禾致源
免疫組庫簡介

免疫組庫(Immune Repertoire,IR)指的是在特定時間段內,機體內T淋巴細胞和B淋巴細胞多樣性的總和,它反映機體免疫系統在特定時間段內應對外界刺激應答的能力,可以準確而全面地反映機體免疫系統的健康狀況,如下圖,健康狀態下人體免疫組庫的多樣性要遠高于疾病狀態。

免疫組庫歷史

245棋牌自20世紀80年代科學家們發現抗體產生的基因重排機理后,人們逐漸認識到機體內免疫細胞克隆應該有一個巨大的庫容(Repertoire),隨之便產生了免疫組庫的概念,但礙于當時一代測序技術的低通量高成本的限制,免疫組庫的研究一直沒有突破性的進展,直到以illumina平臺為主體的二代測序技術的出現,測序速度的提升和測序成本的下降為人們徹底了解免疫組庫的組成帶來了契機。

免疫組庫多樣性

免疫組庫的多樣性呈現“載體”主要包括B淋巴細胞表面受體(BCR)和T淋巴細胞表面受體(TCR)兩大種類,其中BCR包括游離形式的抗體免疫球蛋白,和非游離的結合在細胞表面的受體蛋白。通常我們研究的免疫組庫多樣性呈現“載體”具體指的是IgH(抗體免疫球蛋白重鏈)和TRB(T淋巴細胞表面受體β鏈)的多樣性,兩者分別對應機體的B淋巴細胞主導的體液免疫和T淋巴細胞主導的細胞免疫。目前在眾多物種中,對人的免疫組庫的研究是最成熟和完善的,其次還有小鼠、大鼠、兔子和恒河猴等。

淋巴細胞主導的細胞免疫。目前在眾多物種中,對人的免疫組庫的研究是最成熟和完善的,其次還有小鼠、大鼠、兔子和恒河猴等。研究免疫組庫眾多序列之前,先要構建目標物種的免疫組庫,主要包括B淋巴細胞對應的BCR免疫組庫(主要指IgH)和T細胞對應的TCR免疫組庫(主要指TRB),研究的技術手段主要有:從外周血分離外周血單個核細胞(PBMC)的技術;從組織或細胞中提取gDNA以及RNA的技術;5'-RACE(cDNA5'末端快速擴增);Multiplex PCR(多重PCR)和常規的PCR技術等。根據科研需要,評價免疫組庫多重引物擴增效率時還會用到qPCR(實時熒光定量PCR);將長的PCR產物打斷成固定長度(比如100~200bp)的DNA打斷技術。隨著研究的逐步深入,流式細胞儀鑒定和分選技術、單細胞測序技術等前沿的研究方法也越來越多的加入到免疫組庫的研究中來,這些技術的發展都將為免疫治療、疾病早期診斷及預后監控等帶來新思路。

免疫組庫應用

245棋牌根據對免疫組庫的構建方式及研究內容的了解,我們發現客戶構建的免疫組庫中有一部分恒定區的序列(既固定序列),所以在測序過程中會產生GC不平衡的問題,因此我們不推薦免疫組庫在illumina平臺上進行包lane上機,根據我們的項目經驗,免疫組庫的上機最好是與正常隨機打斷的文庫混合pooling在一起,分在不同的lane中,這樣有助于高質量數據的產出。